EVO视讯提供的大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）培养指南，帮助研究人员更高效地进行细胞培养和管理。以下是详细的细胞培养条件和注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：首次建议按1:2比例传代，2天后更换培养液。请注意，使用无菌离心管收集培养基以便后续对比。如果对比培养效果不佳，建议直接购买我司的完全培养基。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，待细胞状态良好后，填充完全培养液并封闭瓶口是最佳的运输方式。收到细胞后请用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，之后进行处理。在显微镜下观察细胞生长情况，并进行不同倍数的拍照（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片将默认细胞收到时状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml培养基在37℃、5% CO2的孵箱中继续培养；若细胞密度已超80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲瓶底并加入超过5ml的完全培养基终止消化。
3. 轻吹细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻吹细胞使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，沉淀细胞并加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中保存。如需转入液氮罐，必须在-80℃中保存24小时以上再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管后迅速置入37℃水浴中解冻，直至内容物无结晶，外壁用75%酒精擦拭消毒。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，如果细胞贴壁不牢易发生脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养，沉淀加入胰酶，再按上述方法进行重新传代。

五、售后条款

如细胞出现问题的情况，以下为可重发和不可重发的标准：

1）可重发的情况：

1. 运输中细胞损失、瓶身破损、培养液严重泄漏等。
2. 收到后48小时内出现细胞污染，并提供真实实验结果的。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后存活率低，需提供详细照片。
4. 冻存细胞复苏未存活48小时后显现污染的。
5. 细胞活性问题需在7天内通过台盼蓝染色法检测并核实。

2）不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染。
2. 客户操作不当导致细胞状态不良。
3. 使用非推荐培养体系导致问题。
4. 未提供细胞培养前3天的照片。
5. 细胞在收到2天内未告知问题。

我们希望通过EVO视讯的细胞培养指南，帮助每位研究人员更顺利地进行实验，并保证细胞的健康与活性。